CO-IP檢測/WB檢測/ChIP/免疫組化/免疫熒光威斯騰生物

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技術服務信息

服務名稱:CO-IP檢測/WB檢測/ChIP/免疫組化/免疫熒光
服務類別:免疫學服務 - 免疫組化/免疫沉淀/Western blot
價格:詢價
允許參觀:允許參與實驗
所在區域:重慶.重慶
更新時間:2020/1/2 11:46:00
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服務商:威斯騰生物
誠信指數:1719點
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使用范圍:僅限科研使用,不能應用于臨床
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技術服務詳細描述

CO-IP檢測/WB檢測/ChIP/免疫組化/免疫熒光


CO-IP檢測

免疫共沉淀(Co-IP)主要原理是將純化的抗體直接固定在瓊脂糖基質上,從細胞裂解的液或其他復雜混合物中分離天然蛋白復合體。免疫共沉淀是研究蛋白:蛋白相互作用的一種常用方法,即利用抗體去免疫沉淀特定抗原(誘餌蛋白)并且共沉淀任何于該抗原相互作用的蛋白(目的蛋白)。

免疫共沉淀操作步驟

1、 4℃保存的抗體固定柱,4℃ 1500 X g 離心 1min,棄濾液;

2、加入200μl IP裂解液洗滌離心柱,4℃ 1500 X g 離心 1min,棄濾液;

3、加入200μl預冷的 PBS洗滌離心柱,4℃ 1500 X g 離心 1min,棄濾液,于紙上吸干柱頭液體,塞緊塞子;

4、加入(使用對照瓊脂糖樹脂預處理細胞裂解液:4)保存的濾液,擰緊蓋子,4℃孵育3.5h;

5、安裝收集管,取下并保留塞子,旋松蓋子,4℃ 1500 X g 離心 1min,保留濾液;

6、加入200μl預冷的 PBS洗滌離心柱3次,4℃ 1500 X g 離心 1min,棄濾液;

7.安裝收集管,向離心柱中樹脂斜面加入10μl Elution Buffer,1500 X g 離心 1min,保存濾液;加入50μl Elution Buffer,室溫放置5min,1500 X g 離心 1min,保存濾液。


WB檢測

免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質印跡(Western blotting),它是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術。由于免疫印跡具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,現已成為蛋白分析的一種常規技術。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白,并能對蛋白進行定性和半定量分析。

主要實驗步驟如下: 

總蛋白提取

1)組織剪切成細小的碎片。每100mg組織加入1mL RIPA裂解液。用玻璃勻漿器勻漿20次。 

 (2)將勻漿物轉移到1.5 mL離心管。12,000rpm,4 oC離心5min,吸取上清,即可進行后續的電泳、Western或免疫沉淀操作。 

蛋白濃度測定(BCA測蛋白濃度)

檢測樣品的測定

檢測樣品測定時,同 BSA 標準品溶液同時進行測定。

1)分別取100 μL檢測樣品(稀釋100倍)加入到微孔板中,每個樣品取2個平行樣進行測定。

(如果必要,也可選擇與BSA標準品溶液相同的稀釋方法稀釋檢測樣品后測定)                        

2)加入100 μL工作液后,立即混勻。

3)37℃水浴中反應60min后,冷卻至室溫。

4)酶標儀波長設定在562nm 處進行測定。用水校零。盡可能在20min內檢測完畢所有樣品。

5)各樣品溶液的吸光度值減去Blank值的平均值,根據標準曲線計算出檢測樣品的蛋白濃度。     

SDS-PAGE電泳

1)將長短玻璃板對齊后按照方向放入制膠夾中卡緊,然后垂直卡在制膠架子上準備灌膠。

2)配制15%和10%分離膠,加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。將膠加至適量高度(綠線附近)后,輕柔加上雙蒸水壓膠。

3)當水和膠之間有一條折射線時,說明膠已凝了。再等3min使膠充分凝固就可倒去膠上層水并用濾紙將水吸干。

4)配制5%的濃縮膠,加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。將剩余空間灌滿濃縮膠然后將梳子插入濃縮膠中。

5)待濃縮膠凝固后,將含膠的玻璃板加入電泳夾卡緊,放入電泳槽(電極紅對紅,黑對黑)。


染色質免疫共沉淀(ChIP

染色質免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation, ChIP)是研究蛋白質與DNA相互作用的經典實驗方法。它是基于體內分析發展起來的方法,能真實、完整地反映結合在DNA序列上的調控蛋白,是目前確定與特定蛋白結合的基因組區域或確定與特定基因組區域結合的蛋白質的最好方法。隨著新一代測序技術的成熟與發展,整合了染色質免疫共沉淀與高通量測序技術的ChIP-Seq,是研究目標靶蛋白與DNA相互作用的又一技術突破,可應用于組蛋白特異性修飾位點、轉錄因子結合位點等的研究。

技術特點

全基因組覆蓋: ChIP-Seq可在全基因組范圍對蛋白結合位點進行篩選與鑒定

高靈敏度:每個樣本可獲得數百萬條的序列標簽,可發現研究基因組上稀有的蛋白結合位點

高精確率:可獲得高水平的信噪比數據,準確區分真實事件與噪音,精確定位蛋白結合位點

高性價比:僅需較少的數據量即可鑒定全基因組范圍內的結合位點


免疫組化(IHC)

免疫組化是應用免疫學基本原理——抗原抗體反應,即抗原與抗體特異性結合的原理,通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質),對其進行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學技術(immunohistochemistry)或免疫細胞化學技術(immunocytochemistry)


免疫熒光

免疫熒光染色:主要原理是利用抗原抗體之間的特異性結合來顯示目的蛋白,主要包括蛋白和一抗結合,其次是帶有熒光基團的二抗識別并結合一抗,在激光共聚焦系統下即可觀察到熒光。染色程序分為兩步,第一步,用已知未標記的抗體(Anti LC3II)加到未知抗原樣本上;第二步,加上熒光標記的抗球蛋白抗體或抗IgGIgM抗體(Anti Alexa Fluor 647)。如果第一步發生了抗原抗體反應,熒光標記的抗球蛋白抗體就會和已結合抗原的抗體進一步結合,從而可鑒定抗原。

我公司可以提供單標、雙標及三標的免疫熒光服務。


威斯騰實驗服務流程



威斯騰生物服務項目

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分子生物學檢測蛋白質與免疫學動物實驗
實時熒光定量PCR單克隆抗體制備帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP多克隆抗體制備抑郁癥動物模型
ELISA(酶聯免疫吸附法)技術Western-blot 實驗服務脊髓損傷模型
生化指標檢測蛋白雙向電泳實驗服務腦外損傷模型
雙熒光素酶報告基因檢測原核蛋白表達純化骨神經損傷模型
染色質免疫共沉淀(ChIP真核蛋白表達純化心肌缺血模型
GST pull DownITRAQ定量蛋白質組學心力衰竭模型
SLAC蛋白組學肺動脈高血壓動物模型
高血壓模型
病毒包裝實驗課題整體外包粥樣動脈硬化模型
過表達/干擾慢病毒包裝純化整體課題外包大腦中動脈阻塞模型
過表達/干擾腺病毒包裝純化細胞整體實驗外包慢性之氣管炎模型
逆轉錄病毒包裝純化動物整體實驗外包過敏性哮喘模型
腺相關病毒包裝純化肺炎大鼠模型
肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片原代細胞培養肝纖維化模型
細胞因子芯片骨髓間充質干細胞培養膽結石模型
BioPlex懸浮芯片脂肪干細胞培養急性胰腺炎模型
生長因子芯片心肌成纖維細胞培養急性腎衰竭模型
炎癥因子芯片軟骨細胞培養體內血栓模型
血管生成因子芯片血管內皮細胞培養關節炎模型
凋亡因子芯片神經元細胞培養I型和II型糖尿病模型
趨化因子芯片內皮組細胞原代培養裸鼠成瘤
HuProt TM 20K人類蛋白組芯片基因編輯動物
電生理相關服務動物整體實驗服務
膜片鉗實驗
細胞生物學檢測高通量測序代謝組學
細胞原代培養mRNA測序氣相色譜GC/MS
MTT檢測LncRNA測序液相色譜LC/MS
細胞凋亡檢測全基因組測序核磁共震NMR
細胞周期檢測RNA-Seq測序
細胞克隆形成實驗外顯子測序影像學相關實驗
Transwell細胞遷移/侵襲16s擴增子測序Micro-CT
流式分選Small RNA測序小動物活體成像
CCK8/XTT檢測宏基因組測序核磁共振
臺盼藍檢測細胞活性單細胞測序PET-CT
藥物篩選細胞學實驗circleRNA測序
細胞粘附性檢測甲基化測序基因編輯動物
細胞劃痕實驗條件性敲除小鼠/大鼠
細胞生物學整體實驗全基因敲除小鼠/大鼠
細胞成管實驗
病理檢測CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入基因芯片
掃描電鏡基因定點突變細胞系LncRNA芯片
透射電鏡單基因敲除細胞系miRNA芯片
HE染色多基因敲除細胞系mRNA芯片
免疫組化目的基因敲入細胞系甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本)
Tunel(原位末端凋亡法)檢測報告基因敲入細胞系SNP芯片(限人和小鼠來源樣本)
激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除細胞系
免疫熒光
Masson染色CRISPR/Cas9動物敲除/敲入科研設計指導&文章評估/潤色
原位雜交基因敲除大鼠/小鼠科研文獻論著翻譯
熒光原位雜交基因敲入大鼠/小鼠論文翻譯潤色服務
特殊染色(PSA、茜素紅、阿爾新藍等)臨床實驗/科研實驗設計方案指導
行為學檢測藥物篩選服務項目藥效學評價
曠場實驗高通量自動藥物篩選平臺抗腫瘤藥物藥效學評價
重復性刻板行為檢測細胞高內涵藥物篩選平臺心血管系統藥物藥效學評價
動物跑臺檢測蛋白質組學靶標研發平臺泌尿系統藥物藥效學評價
強迫游泳分子藥理研究平臺內分泌系統藥物藥效學評價
生物膜片鉗藥物篩選平臺抗炎免疫藥物藥效學評價
常規藥物體外篩選

【本平臺合作項目】
分子生物學、細胞生物學、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學檢測、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務! 
【全國免費熱線】400-675-6758
【電話】 023-65316016,023-65316556
【郵箱】 [email protected]
【官網網址】www.cqwestern.com
【地址】 重慶市高新區二郎創業大道高科創業園D棟2樓   


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  Western blot 免疫印跡實驗   [供應商:復醫生科科研服務中心]
  免疫組化(ihc)技術服務   [供應商:上海拜力生物科技有限公司]
  免疫共沉淀(Co-IP)   [供應商:上海玉華生命科技發展公司]
  免疫印跡 Western blot   [供應商:上海捷蘭生物技術有限公司]
  免疫組化   [供應商:廈門生命互聯科技有限公司]

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