Western Blottting工作流程,GE領先解決方案通用電氣醫療集團生命科學部(GEHC)

金牌供應商 

技術服務信息

服務名稱:Western Blottting工作流程,GE領先解決方案
服務類別:免疫學服務 - 免疫組化/免疫沉淀/Western blot
價格:100元
允許參觀:協商決定
所在區域:上海.上海
更新時間:2019/8/15 9:05:00
瀏覽人數:424
誠信指數:1494點
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使用范圍:僅限科研使用,不能應用于臨床
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通用電氣醫療集團生命科學部(GEHC)
地址:
上海浦東張江高科技區華佗路1號
郵編:
100176
電話:
800-810-9118
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聯系人:
所在區域:
上海·上海
郵件:
公司展臺:

技術服務詳細描述

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問題 可能原因 解決方法 推薦
無信號 一抗和二抗不匹配 二抗需和一抗宿主的物種相同(如一抗來自兔,二抗為抗兔抗體)。 抗體查詢點擊此處
沒有足夠的一抗或二抗結合目標蛋白 使用高濃度抗體,延長4℃孵育時間(如過夜)。 抗體查詢點擊此處
封閉劑與一抗或二抗有交叉反應 使用溫和的去污劑如吐溫-20,或更換封閉劑(常用的脫脂奶粉、BSA、血清或明膠)。 封閉劑查詢點擊此處
一抗不識別檢測物種的蛋白 參照說明書,比對免疫原序列和蛋白序列以確保抗體和目的蛋白會發生反應,設置陽性對照。 抗體查詢點擊此處
轉膜不充分 使用可逆染色劑例如麗春紅S檢測轉膜效果,檢查轉膜操作是否正確。PVDF膜需預先浸在甲醇中,然后浸到轉移緩沖液中。 轉膜查詢點擊此處
洗膜過度 勿過度洗膜。 轉膜查詢點擊此處
過度封閉使目標蛋白不能顯色 代替5%脫脂奶粉,使用含0.5%脫脂奶粉或無脫脂奶粉的抗體稀釋液,或更換封閉劑,減少封閉時間。 封閉劑查詢點擊此處
一抗失效 使用新鮮一抗,重復使用有效濃度會降低。 抗體查詢點擊此處
二抗受疊氮鈉抑制 避免疊氮鈉和HRP標記抗體一起使用。 抗體查詢點擊此處
檢測試劑盒過期和底物失活 使用新鮮的底物。 檢測試劑查詢點擊此處
背景高 未進行非特異性封閉或封閉不充分 延長封閉時間,考慮更換合適的封閉劑。推薦使用5%脫脂奶粉、3%BSA或血清封閉30分鐘。這些可以包含在抗體緩沖液中。 封閉劑查詢點擊此處
一抗濃度過高 稀釋抗體至合適濃度,以更高稀釋度抗體孵育更長時間。 抗體查詢點擊此處
抗體孵育溫度過高 4℃孵育。 抗體查詢點擊此處
二抗與封閉劑非特異性結合或反應 設置二抗對照(不加一抗)。 抗體查詢點擊此處
一抗或二抗與封閉劑有交叉反應 在孵育和洗滌液中加入溫和去污劑如吐溫-20。脫脂奶粉含有酪蛋白,該蛋白本身就是一種***酸化蛋白,會結合***酸化特異性抗體而易產生高背景。使用BSA代替奶粉作為封閉劑。 抗體查詢點擊此處
未結合蛋白質洗滌不充分 增加洗滌次數。 轉膜查詢點擊此處
膜的選擇導致的高背景 NC膜比PVDF膜背景低。 NC膜查詢點擊此處
膜干燥 在孵育過程中防止膜變干,在任何步驟都保證膜有充分的反應液,放入攪拌子不斷攪動或輕輕震蕩使膜浸在溶液中。 轉膜查詢點擊此處
“微笑”條帶 遷移過快;電泳溫度過高(改變了PH值和遷移速度) 降低遷移速度或低溫電泳(冰庫或冰上) 電泳試劑查詢點擊此處

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